New role of astrocytes in neuroprotective mechanisms after ischemic stroke / Novo papel dos astrócitos nos mecanismos neuroprotetores após acidente vascular cerebral isquêmico

Abstract Astrocytes are the most abundant cell subtypes in the central nervous system. Previous studies believed that astrocytes are supporting cells in the brain, which only provide nutrients for neurons. However, recent studies have found that astrocytes have more crucial and complex functions in the brain, such as neurogenesis, phagocytosis, and ischemic tolerance. After an ischemic stroke, the activated astrocytes can exert neuroprotective or neurotoxic effects through a variety of pathways. In this review, we will discuss the neuroprotective mechanisms of astrocytes in cerebral ischemia, and mainly focus on reactive astrocytosis or glial scar, neurogenesis, phagocytosis, and cerebral ischemic tolerance, for providing new strategies for the clinical treatment of stroke.

Resumo Os astrócitos são os subtipos de células mais abundantes no sistema nervoso central. Estudos anteriores acreditavam que os astrócitos são células de suporte no cérebro, que apenas fornecem nutrientes para os neurônios. No entanto, estudos recentes descobriram que os astrócitos têm funções mais cruciais e complexas no cérebro, como neurogênese, fagocitose e tolerância isquêmica. Após um acidente vascular cerebral isquêmico, os astrócitos ativados podem exercer efeitos neuroprotetores ou neurotóxicos através de uma variedade de vias. Nesta revisão, discutiremos os mecanismos neuroprotetores dos astrócitos na isquemia cerebral, e focaremos principalmente na astrocitose reativa ou cicatriz glial, neurogênese, fagocitose e tolerância isquêmica cerebral, para fornecer novas estratégias para o tratamento clínico do acidente vascular cerebral.

Neutrophils phagocytosing fungal hyphae in urinary sediment / Neutrófilos fagocitando hifas no sedimento urinário

Abstract The Phagocytosis of fungal structures by neutrophils is a well-documented function of these immune cells. However, neutrophil phagocytosis of hyphal structures in the urine sediment is not usually observed during routine sample evaluation. This is a case of hyphal phagocytosis by neutrophils in the urine of a kidney allograft recipient patient.

Resumo A fagocitose de estruturas fúngicas por neutrófilos é uma função bem documentada destas células imunes. No entanto, a fagocitose de hifas por neutrófilos no sedimento urinário não é normalmente observada durante avaliação de rotina de amostras. Este é um caso de fagocitose de hifas por neutrófilos na urina de um paciente receptor de aloenxerto renal.

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function

ABSTRACT: Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.

RESUMO: Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.

Phagocytic activity of monocytes and neutrophils in patients with periodontitis, whether or not associated to type 2 diabetes / Atividade fagocítica de monócitos e neutrófilos em pacientes com periodontite, associada ou não ao diabetes tipo 2

ABSTRACT Phagocytic functions by neutrophils/ monocytes and biochemical parameters were assessed in peripheral blood of patients with periodontitis, whether or not associated to type 2 diabetes, or patients with type 2 diabetes, or systemically healthy people. Fifty-eight participants were divided into four groups: Control - systemically and periodontally healthy patients (C, n=16), Periodontitis (P, n=14), Type 2 Diabetes (DM, n=11) and Periodontitis associated with type 2 diabetes (DMP, n=17). Blood samples were used to analyze phagocytic activity and the production of superoxide anion using optical microscopy. Significantly lower phagocytic activity of neutrophils was observed in non-opsonized samples (p = 0.008, Kruskal- Wallis) of the periodontitis group and in opsonized samples (p = 0.029, Kruskal-Wallis) of the periodontitis associated with type 2 diabetes group when these groups were compared to the healthy individuals when a 20:1 yeast: phagocyte stimulus was used. Periodontitis patients, whether associated (p = 0.0007, sensitized; Kruskal-Wallis, 20:1) or not with diabetes (p = 0.018 and 0.0007, in the proportions 5:1 and 20:1 yeast: monocyte respectively in sensitized samples; Kruskal-Wallis) also showed lower phagocytic function of monocytes compared to the control group. There was no significant difference in the production of superoxide anion among the evaluated groups. Severe clinical attachment loss was associated with lower levels of HDL in periodontitis patients and a higher percentage of A1C in diabetes with periodontitis patients (p<0.05; Pearson and Spearman correlations, respectively). Patients with both associated diseases had higher levels of triglycerides and CRP (p<0.001, Kruskal-Wallis) compared to patients with diabetes only. The results of the present study suggest that periodontitis negatively interferes with the innate immune response and may represent a major risk of systemic complications such as cardiovascular disease in diabetic patients or even in healthy individuals.

RESUMO As funções fagocíticas de neutrófilos/monócitos e parâmetros bioquímicos foram avaliados no sangue periférico de pacientes com periodontite com ou sem diabetes do tipo 2, ou em pacientes com diabetes tipo 2, ou em pessoas saudáveis sistemicamente. 58 participantes foram divididos em quatro grupos: Controle - pacientes sistemicamente e periodontalmente saudáveis (C, n = 16), Periodontite (P, n = 14), Diabetes Tipo 2 (DM, n = 11) e Periodontite associada a diabetes tipo 2 (DMP, n = 17). Amostras de sangue foram usadas para analisar a atividade fagocítica e a produção de ânion superóxido por microscopia óptica. Observou-se menor atividade fagocítica dos neutrófilos em amostras não opsonizadas (p = 0,008, Kruskal-Wallis) do grupo periodontite e em amostras opsonizadas (p = 0,029, Kruskal-Wallis) do grupo periodontite associada ao diabetes tipo 2 quando esses grupos foram comparados aos indivíduos saudáveis sob um estímulo de levedura:monócito de 20:1. Pacientes com periodontite associada (p = 0,0007, sensibilizados; Kruskal-Wallis, 20: 1) ou não com diabetes (p = 0,018 e 0,0007, nas proporções 5: 1 e 20: 1 de levedura: monócito, respectivamente, em amostras sensibilizadas; Kruskal- Wallis) também demonstraram menor função fagocítica dos monócitos em comparação com o grupo controle. Não houve diferença significativa na produção de ânion superóxido entre os grupos avaliados. A perda de inserção clínica grave foi associada a níveis mais baixos de HDL na periodontite e maior percentual de A1C nos pacientes com periodontite associada ao diabetes (p<0,05; correlações de Person e Spearman, respectivamente). Os pacientes com ambas as doenças associadas apresentaram níveis mais altos de triglicerídeos e PCR (p<0,001, Kruskal- Wallis) em comparação aos pacientes com somente diabetes. Os resultados do presente estudo sugerem que a periodontite interfere negativamente na resposta imune inata e pode representar um risco maior para complicações sistêmicas, como a doença cardiovascular, em pacientes com diabetes ou mesmo em indivíduos saudáveis.

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function / Efeito de flunixin ou cetoprofeno em cordeiras submetidas a caudectomia por elastração: dor e função neutrofílica

Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.(AU)

Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.(AU)

Avaliação da atividade funcional dos neutrófilos sanguíneos em ovelhas primíparas e pluríparas da raça Lacaune / [Functional evaluation of blood neutrophils in primiparous and pluriparous Lacaune ewes]

This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)

Fatores de virulência e susceptibilidade a antifúngicos de Cryptococcus Spp / Virulence factors and susceptibility to Cryptococcus Spp. antifungals

Criptococose é uma doença grave que afeta tanto imunocomprometidos quanto imunocompetentes, com isso analisar a virulência é fundamental para novas terapêuticas. Objetivo: Analisar a capacidade de virulência e susceptibilidade aos antifúngicos de Cryptococcus spp. isolados de líquor de pacientes de hospital do norte do Paraná. Métodos: A partir de dois isolados clínicos C. neoformans e C. gattii, realizou-se a confirmação da identificação. Para a virulência, avaliou-se o tamanho da cápsula, capacidade de sobrevivência após exposição a neutrófilos, produção de melanina e urease. No antifungigrama por difusão em disco utilizou-se: anfotericina B, cetoconazol, voriconazol, itraconazol e miconazol. Resultados: C. gattii destaca-se por maior desenvolvimento da cápsula além da melhor capacidade de sobreviver a fagocitose em relação ao C. neoformans. No antifungigrama, ambos os isolados se apresentam sensíveis às drogas estudadas. Conclusão: Esses achados contribuem para a compreensão das diferentes patogêneses entre C. gattii e C. neoformans.

Cryptococcosis is a serious disease that can affect both immunocompromised and immunocompetent individuals, thus the virulence analysis is fundamental for the development of new treatments. Objective: To analyze the virulence and susceptibility of Cryptococcus spp. isolated from cerebrospinal fluid of patients from a hospital in the north of Paraná. Methods: From two clinical isolates, C. neoformans and C. gattii were confirmed and identified. For virulence, capsule size, survival capacity after exposure to neutrophils, melanin production and urease were evaluated. In the disc-diffusion method, the following antifungals were used: amphotericin B, ketoconazole, voriconazole, itraconazole and miconazole Results: It was observed that C. gattii presents greater results for development of the capsule beside presenting the best ability to survive phagocytosis in relation to C. neoformans. In the disc-diffusion method, both isolates presented sensitivity to the studied drugs. Conclusion: These findings contribute to the understanding of the different pathogens between C. gattii and C. neoformans.

Increased leishmanicidal activity of alveolar macrophages from mature horses with mild equine asthma / Aumento da atividade leishmanicida de macrófagos alveolares de equinos adultos com asma equina leve

Alveolar macrophages (AMs) are an essential part of defense mechanisms within the lungs and their phagocytic activity is important for organ homeostasis. The phagocytic ability of AMs obtained from bronchoalveolar lavage from 17 mature mixed-breed pleasure horses (8 healthy and 9 diagnosed with mild equine asthma) was studied through assays with Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes, which enabled the calculation of a phagocytic index (PI) and a survival index (SI). Results indicate that phagocytic activity of AMs in asthma affected horses is similar to healthy horses, while leishmanicidal activity is significantly increased in horses with asthma.(AU)

Os macrófagos alveolares (MAs) são uma parte essencial dos mecanismos de defesa dentro dos pulmões e sua atividade fagocítica é importante para a homeostase desse órgão. A capacidade fagocitária dos MAs obtidos do lavado broncoalveolar de 17 equinos adultos, sem raça definida (oito saudáveis e nove com diagnóstico de asma equina leve), foi estudada por meio de ensaios com promastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis. Foi calculado o índice fagocítico e o índice de sobrevivência. Os resultados indicam que a atividade fagocítica de MAs em cavalos com asma é semelhante a cavalos saudáveis, enquanto a atividade leishmanicida está significativamente aumentada em cavalos com essa enfermidade.(AU)

Intracellular reactive oxygen species production and phagocytosis of Staphylococcus aureus by milk neutrophils as tool to diagnose mastitis and identify susceptible dairy cows / Produção intracelular de espécies reativas de oxigênio e fagocitose de Staphylococcus aureus por neutrófilos lácteos como ferramentas para o diagnóstico da mastite e identificação de vacas leiteiras susceptíveis à mastite

The immune response capacity of the mammary gland plays a major role to determine if mastitis will or not be established. Thus, we hypothesize that a better understanding of polymorphonuclear neutrophil leukocyte (PMN) function will elucidate mechanisms that will improve our knowledge of how we could avoid an inflammatory process by increasing the immune capacity of the cow, and even further, to search for a tool to diagnose mastitis or a possible way to select and identify non-susceptible animals. The present study utilized 112 quarters from 28 Holstein dairy cows that were divided into quarters milk samples with somatic cell count (SCC) <2×105 cells mL-1 (n=72) and SCC >2×105 cells mL-1 (n=40). The percentages of milk PMNs and the levels of intracellular reactive oxygen species (ROS) and the phagocytosis of Staphylococcus aureus by milk neutrophils were evaluated by flow cytometry. Our results showed a higher percentage of neutrophils in quarter milk samples with high SCC (P=0.0003), and this group also had a significantly higher percentage of neutrophils that produced ROS (P=0.008). On the other hand, the phagocytosis intensity of S. aureus by milk neutrophils was higher in quarters with low SCC (P=0.003), suggesting a better mammary gland immunity against invading pathogens. Analyzing the results of the predictive values of the measured PMN functions, they cannot be used isolated as a good diagnosis test since none of them had a satisfactory sensitivity and specificity values, which was also confirmed by the Youden index values being far from one. In conclusion, the assessment of milk bovine neutrophil functions could improve our understanding of the cellular basis of mastitis. Although, the intracellular ROS production and S. aureus phagocytosis by milk neutrophil did not have high predictive values to detect intramammary infections, our results strengthen the idea that that poor bovine mammary gland neutrophil phagocytic ability may be associated with high SCC, and might be considered to identify susceptible dairy cows to mastitis.(AU)

A resposta imune da glândula mamária desempenha um papel importante ao determinar o estabelecimento da infecção. Desta forma, a melhor compreensão da função dos neutrófilos irá nos subsidiar conhecimentos, pelo qual podemos evitar o processo inflamatório pela otimização da resposta imune de bovinos leiteiros, e fornece ferramentas para diagnosticar a mastite ou um possível instrumento para identificar e selecionar animais resistentes à infecção intramamária, aumentando a produtividade do rebanho. O presente estudo utilizou 112 amostras provenientes de quartos mamários de 28 vacas Holandesas que foram divididos em amostras de leite com baixa (n=72; <2×105 células mL-1) ou alta (n=40; 2×105 células mL-1) contagem de células somáticas (CCS). A porcentagem de neutrófilos no leite, a produção intracelular de espécies reativas de oxigênio (ERO) e a fagocitose de Staphylococcus aureus pelos neutrófilos do leite foram avaliadas por citometria de fluxo. Os resultados do presente estudo demonstraram maior percentagem de neutrófilos (CH138+; P=0,0003) e percentagem de neutrófilos que produziram ERO (P=0,008) em amostras de leite com alta CCS. Por outro lado, a intensidade de fagocitose de S. aureus por neutrófilos em amostras de leite com baixa CCS (P=0,003), que demonstra maior atividade funcional destas células neste grupo. As funções neutrofílicas para o diagnóstico da mastite não apresentaram valores de sensibilidade e especificidade altos, que foram confirmados pelo índice Youden. Desta forma, conclui-se que a produção intracelular de ERO e fagocitose de S. aureus pelos neutrófilos do leite não apresentaram valores preditivos altos para detecção de mastite. Além disto, os resultados do presente estudo reforçam a ideia de neutrófilos do leite com menor capacidade fagocítica podem ser associados à alta CCS, e pode ser considerado como uma ferramenta para identificar animais mais susceptíveis à infecções intramamárias.(AU)

Influence of orchiectomy of seven month old bulls on bronchoalveolar immune function / Influência da orquiectomia na função imune broncoalveolar de garrotes de sete meses de idade

The present study evaluated the impact that orchiectomy, a routine but painful intervention in bovine husbandry, can cause on pulmonary immunity. To identify whether orchiectomy can impair lung defense, analyses of serum cortisol concentration and of alveolar macrophage and their function (phagocytosis and respiratory burst) were evaluated. Sixteen Holstein bulls (7 mo old, 250±50kg of body weight BW) were divided in two homogeneous groups - the castrated group and the sham group - and the sample were collected on Days -7, 1 and 7 relative to the day of the procedure. Serum cortisol concentration statistically increased on Days 1 and 7 (D-7: 4,97±1,28ng/ml; D1: 6,35 ±1,10ng/ml; D7: 8,28±1,94ng/ml) after castration and these variables seem to impact the alveolar macrophage percentage on D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) and their respective function of phagocytosis (P) and the oxidative burst (OB) on Days 1 and 7 for the castrated group (P D-7: 56,25±15,63 arbitrary values; D1: 54,75±14,07 arbitrary values; D7: 31,77±8,44 arbitrary values; and OB D-7: 222,34±39,52 arbitrary values; D1: 135,25±37,68 arbitrary values; D7: 117,73±18,17 arbitrary values). These results indicate that surgical castration affected lung defense until seven days after the practice, so the pulmonary cell function was impaired for a period higher than that reported in the literature.(AU)

O presente estudo avaliou o impacto que a orquiectomia, uma intervenção dolorosa comumente realizada durante a criação de bovinos, pode causar na imunidade pulmonar. Para tanto, foram realizadas dosagens de cortisol sérico, bem como a análise de macrófagos alveolares e suas funções (fagocitose e metabolismo oxidativo) de 16 bovinos da raça Holandesa preto e branco (sete meses de idade, 250±50kg de peso vivo). Esses animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos homogêneos - grupo castrado e grupo controle - e foram avaliados nos dias -7, 1 e 7, relativos ao dia do procedimento cirúrgico, que foi realizado no dia 0. A concentração de cortisol sérico aumentou estatisticamente nos dias 1 e 7 em relação ao grupo controle (D-7: 4,97±1,28ng/mL; D1: 6,35 ±1,10ng/mL; D7: 8,28±1,94ng/mL). Notou-se diminuição de macrófagos alveolares no D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) e de suas funções de fagocitose (F) e metabolismo oxidativo (MO) nos dias 1 e 7 (F D-7: 56,25±15,63 valores arbitrários; D1: 54,75±14,07 valores arbitrários; D7: 31,77±8,44 valores arbitrários; e MO D-7: 222,34±39,52 valores arbitrários; D1: 135,25±37,68 valores arbitrários, D7: 117,73±18,17 valores arbitrários) para o grupo castrado. Esses resultados demonstram que a orquiectomia afeta as defesas pulmonares por até sete dias após a prática, período superior ao relatado pela literatura.(AU)

Avaliação funcional dos fagócitos do sangue e da secreção mamária de vacas no período pós-parto imediato / Functional assessment of phagocytes from blood and mammary secretion of cows in the immediate postpartum period

The peripartum is characterized by immune and physiological changes in the mammary glands of cows, making them more susceptive to mastitis. This work aimed to evaluate the phagocytosis of Escherichia coli by phagocytes from blood and colostrum from healthy Holstein cows. Samples from 22 female, heifers and cows, were obtained during the first postpartum milking for evaluation of phagocytosis in glass cover slip, after stimulation with E. coli. The proportion of spreading blood phagocytes was higher when cells were stimulated with bacteria (p=0.003). However, the phagocytosis rate was low and similar to that observed when blood cells were unstimulated (p=0.299). Colostrum showed higher rates of spreading (p=0.000) and phagocytosis (p=0.001) when phagocytes were stimulated with E. coli. Comparing the results obtained for blood and colostrum, a higher proportion of not spreading phagocytes without bacteria inside, when stimulated (p=0.000) or not (p=0.002) with bacteria, was observed in blood. There was a higher spreading rate in colostrum when phagocytes were stimulated with E. coli (p=0.002). There was no difference in the percentage of phagocytosis in blood or colostrum samples incubated (p=0.478) or not (p=0.071) with bacteria. The results showed that E. coli influenced the activity of blood and colostrum phagocytes from Holstein cows in the immediate postpartum period, and will assist in the understanding of the immunological mechanisms that occurs in this period, considered as the most susceptible to infections in cows.

O periparto caracteriza-se por mudanças imunes e fisiológicas na glândula mamária das fêmeas bovinas, ­tornando-as mais susceptiveis às mastites. Este trabalho teve o objetivo de avaliar a fagocitose da bactéria Escherichia coli pelos fagócitos do sangue e do colostro de vacas hígidas da raça Holandesa. Amostras provenientes de 22 fêmeas, entre novilhas e vacas, foram obtidas durante a primeira ordenha pós-parto, para avaliação da fagocitose, em lamínula de vidro, após estímulo com E. coli. A proporção de fagócitos espraiados do sangue foi maior quando as células foram estimuladas com bactérias (p=0,003), no entanto a taxa de fagocitose foi baixa e semelhante à observada quando as células não foram estimuladas (p=0,299). No colostro, foram constatados maiores índices de fagocitose (p=0,001) e espraiamento (p=0,000) quando os fagócitos foram estimulados com E. coli. Comparando-se os resultados obtidos para o sangue e o colostro, verificou-se, no sangue, maior proporção de fagócitos não espraiados e que não apresentavam bactérias no seu interior, estimulados (p=0,000) ou não (p=0,002) com bactéria. Houve maior taxa de espraiamento nos fagócitos do colostro quando estimulados com E. coli (p=0,002). Não se viu diferença nos percentuais de fagocitose entre as amostras de sangue e colostro incubadas (p=0,478) ou não (p=0,071) com bactérias. Os resultados permitiram concluir que E. coli influenciou no espraiamento dos fagócitos do sangue e do colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa no período do pós-parto imediato e auxiliarão na compreensão dos mecanismos imunológicos ocorridos nesse período, considerado o de maior susceptibilidade das fêmeas bovinas às infecções.

Avaliação funcional dos fagócitos do sangue e da secreção mamária de vacas no período pós-parto imediato / Functional assessment of phagocytes from blood and mammary secretion of cows in the immediate postpartum period

O periparto caracteriza-se por mudanças imunes e fisiológicas na glândula mamária das fêmeas bovinas, ­tornando-as mais susceptiveis às mastites. Este trabalho teve o objetivo de avaliar a fagocitose da bactéria Escherichia coli pelos fagócitos do sangue e do colostro de vacas hígidas da raça Holandesa. Amostras provenientes de 22 fêmeas, entre novilhas e vacas, foram obtidas durante a primeira ordenha pós-parto, para avaliação da fagocitose, em lamínula de vidro, após estímulo com E. coli. A proporção de fagócitos espraiados do sangue foi maior quando as células foram estimuladas com bactérias (p=0,003), no entanto a taxa de fagocitose foi baixa e semelhante à observada quando as células não foram estimuladas (p=0,299). No colostro, foram constatados maiores índices de fagocitose (p=0,001) e espraiamento (p=0,000) quando os fagócitos foram estimulados com E. coli. Comparando-se os resultados obtidos para o sangue e o colostro, verificou-se, no sangue, maior proporção de fagócitos não espraiados e que não apresentavam bactérias no seu interior, estimulados (p=0,000) ou não (p=0,002) com bactéria. Houve maior taxa de espraiamento nos fagócitos do colostro quando estimulados com E. coli (p=0,002). Não se viu diferença nos percentuais de fagocitose entre as amostras de sangue e colostro incubadas (p=0,478) ou não (p=0,071) com bactérias. Os resultados permitiram concluir que E. coli influenciou no espraiamento dos fagócitos do sangue e do colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa no período do pós-parto imediato e auxiliarão na compreensão dos mecanismos imunológicos ocorridos nesse período, considerado o de maior susceptibilidade das fêmeas bovinas às infecções.(AU)

The peripartum is characterized by immune and physiological changes in the mammary glands of cows, making them more susceptive to mastitis. This work aimed to evaluate the phagocytosis of Escherichia coli by phagocytes from blood and colostrum from healthy Holstein cows. Samples from 22 female, heifers and cows, were obtained during the first postpartum milking for evaluation of phagocytosis in glass cover slip, after stimulation with E. coli. The proportion of spreading blood phagocytes was higher when cells were stimulated with bacteria (p=0.003). However, the phagocytosis rate was low and similar to that observed when blood cells were unstimulated (p=0.299). Colostrum showed higher rates of spreading (p=0.000) and phagocytosis (p=0.001) when phagocytes were stimulated with E. coli. Comparing the results obtained for blood and colostrum, a higher proportion of not spreading phagocytes without bacteria inside, when stimulated (p=0.000) or not (p=0.002) with bacteria, was observed in blood. There was a higher spreading rate in colostrum when phagocytes were stimulated with E. coli (p=0.002). There was no difference in the percentage of phagocytosis in blood or colostrum samples incubated (p=0.478) or not (p=0.071) with bacteria. The results showed that E. coli influenced the activity of blood and colostrum phagocytes from Holstein cows in the immediate postpartum period, and will assist in the understanding of the immunological mechanisms that occurs in this period, considered as the most susceptible to infections in cows.(AU)

Characterization of inflammatory markers associated with systemic lupus erythematosus patients undergoing treatment / Caracterização de marcadores inflamatórios associados a pacientes com lúpus eritematoso sistêmico em tratamento

ABSTRACT Objective: To characterize the inflammatory profiles of patients with systemic lupus erythematosus receiving standard treatment compared to healthy controls. Patients and methods: Peripheral venous blood was collected from systemic lupus erythematosus patients (n = 14) and controls (n = 18) at enrollment. Blood samples were used for quantification, by flow cytometry, of CD11b (integrin) and Chemokine receptor CXCR2 expression surface antigen in neutrophils and lymphocytes, while cytokines were assayed in serum samples. Purified neutrophils were assayed by their ability to phagocytize human plasma-opsonized zymosan. Results: Patients had a median (interquartile range) disease activity index of 1.0 (0-2.0) characteristic of patients in remission. Interleukin-6 and interleukin-10 serum concentrations were significantly higher in the patient group compared to controls and the phagocytic index of circulating neutrophils was significantly reduced in patients compared to controls. The levels of interleukin-2, interleukin-5, interleukin-8 and tumor necrosis factor alpha did not significantly differ between patients and controls. Flow cytometric analysis revealed that the integrin expression levels were reduced in lymphocytes (but not in neutrophils) obtained from systemic lupus erythematosus patients, while surface expression of the chemokine receptor 2 was similar in both neutrophils and lymphocytes. Conclusion: Systemic lupus erythematosus patients receiving standard treatment presented with elevated systemic levels of interleukin-6 and interleukin-10, reduced neutrophil phagocytic capacity, and reduced lymphocyte expression of integrin even when symptoms were in remission. These alterations to innate immune components may put these individuals at a greater risk for acquiring infections.

RESUMO Objetivo: Caracterizar os perfis inflamatórios de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) que recebiam o tratamento padrão em comparação com controles saudáveis. Pacientes e métodos: Coletou-se o sangue venoso periférico de pacientes com LES (n = 14) e controles (n = 18) no momento da entrada no estudo. As amostras de sangue foram usadas para quantificação, por citometria de fluxo, da expressão dos antígenos de superfície CD11b (integrina) e CXCR2 em neutrófilos e linfócitos, enquanto as citocinas foram avaliadas em amostras de soro. Avaliou-se a capacidade dos neutrófilos purificados de fagocitar zimosan opsonizado com plasma humano. Resultados: Os pacientes apresentavam uma pontuação mediana (intervalo interquartil) no Sledai de 1 (0-2), característica de pacientes em remissão. As concentrações séricas de IL-6 e IL-10 foram significativamente maiores no grupo de pacientes em comparação com os controles; o índice de fagocitose de neutrófilos circulantes estava significativamente reduzido nos pacientes em comparação com os controles. Os níveis de IL-2, IL-5, IL-8 e TNF-α não diferiram significativamente entre pacientes e controles. A análise da citometria de fluxo revelou que os níveis de expressão de CD11b estavam reduzidos nos linfócitos (mas não nos neutrófilos) obtidos de pacientes com LES, enquanto a expressão do receptor de superfície CXCR2 foi semelhante em neutrófilos e linfócitos. Conclusão: Os pacientes com LES que recebiam tratamento padrão apresentaram níveis sistêmicos elevados de IL-6 e IL-10, redução na capacidade fagocítica dos neutrófilos e redução da expressão de CD11b em linfócitos, mesmo quando os sintomas estavam em remissão. Essas alterações nos componentes da imunidade inata podem colocar esses indivíduos em maior risco de adquirir infecções.

Influência da suplementação de vitaminas A, D e E na função imune de bezerros alimentados com dieta á base de feno capim tifton (cynodon spp) / Influence of A, D and E vitamin supplements on immune function of calves fed diet tifton (cynodon spp) hay

As vitaminas são compostos orgânicos necessários em poucas quantidades no organismo, todavia indispensáveis para as funções metabólicas. Elas se inserem em inúmeras reações metabólicas, fisiológicas e imunes das células, necessárias para a manutenção da saúde animal, além de atuarem como imunoestimulante. Embora a dieta rica em folhagens verdes frescas forneça quantidades suficientes de vitaminas A, D e E a suplementação intensiva com alimentos conservados na forma de feno ou silagem pode reduzir em até 50 % dos teores destas vitaminas no alimento. Diante disso, a proposta do trabalho foi verificar se a administração parenteral de vitaminas A, D e E age como imunoestimulante em garrotes estabulados e alimentados exclusivamente com feno de tifton. Para tanto 14 bovinos foram divididos em dois grupos homogêneos, sendo o grupo S, suplementado com vitamina A, D e E em dose única de 30 mL por via intramuscular; e o grupo C, sem suplementação. Ambos os grupos foram alojados em baias parcialmente privadas de sol, e alimentados com feno por um período de três meses. A avaliação imune foi realizada por hemogramas e ensaio de função leucocitária (metabolismo oxidativo e fagocitose) nos momentos antes do tratamento, três e dez dias após os tratamentos. Tendo em vista que a suplementação com polivitamínicos A, D e E aumentou a porcentagem da atividade de células granulocítica e a intensidade da atividade de células mononucleares, além de intensificar o efeito antioxidante prolongando a sobrevida de hemácias e neutrófilos, conclui-se que esta suplementação promoveu efeito benéfico na resposta imune de bezerros da Raça Holandesa, apesar dos efeitos deletérios da alimentação exclusiva com feno e da privação parcial da incidência solar direta.

Vitamins are organic compounds which are required in small quantities in the body, however essential for the metabolic functions. They participate in numerous metabolic reactions, physiological and immune cells, needed to maintain animal health, as well as act as immunostimulants. Although the diet rich in fresh green foliage provides sufficient amounts of vitamin A, D and E, intensive supplementation with food stored in the form of hay or silage can reduce up to 50% of the levels of these vitamins in food. Given this, the proposal of this study was to verify how the parenteral administration of vitamins ADE acts as immunostimulant in steers fed exclusively with hay of tifton. For that, 14 cattle were divided into two homogeneous groups: Group S, supplemented with vitamin A, D e E given in a single intramuscular dose of 30mL, and Group C without supplementation. Both groups were housed in private stalls and fed with hay for a period of three months. Immune evaluation was performed by blood count and testing of leukocyte function (oxidative metabolism and phagocytosis) in the moments before treatment, three and ten days after the treatments. Considering that supplementation with vitamin A, D e E increased the percentage of granulocytic cell activity and the intensity of the activity of mononuclear cells, as well as intensified the antioxidant effect prolonging the survival of red blood cells and neutrophils, it can be concluded that this treatment had a beneficial effect on the immune response of Holstein calves, despite the damaging effects of exclusive feeding hay, and the partially deprivation of solar incidence.

Estudo da capacidade fagocítica de macrófagos humanos frente a diferentes cepas de Enterococcus faecalis / Study of phagocytic ability of human macrophages against different strains of Enterococcus faecalis

Enterococcus faecalis (E. faecalis) é um microrganismo presente em lesões endodônticas persistentes, mostrando maior resistência do que outras bactérias ao Hidróxido de Cálcio, um medicamento alcalino que consegue eliminar diversos microrganismos durante o tratamento endodôntico. Assim, os objetivos desse estudo foram: (a) avaliar a resposta de E. faecalis isolados de canal radicular, após estresse alcalino, quanto sobrevivência, crescimento, alteração do pH, resistência/susceptibilidade antimicrobiana e formação de biofilme sobre discos de dentina; (b) avaliar a capacidade fagocítica e produção de óxido nítrico (NO) por macrófagos humanos, frente a bactérias E. faecalis de canais radiculares, submetidas a estresse alcalino; (c) avaliar a expressão de TLR2 e CD14 na superfície dos macrófagos desafiados com as diferentes cepas bacterianas. As cepas utilizadas foram: ATCC4083 (CANAL 1) e uma cepa clínica, obtida por nós, a partir de uma lesão endodôntica primária (CANAL 2), ambas isoladas de canais radiculares; e ATCC29212 isolada de urina (URINA), utilizada como controle. O estresse alcalino foi obtido através da inoculação das bactérias em meio BHIalcalino por 4, 24, 48 e 72 horas. As bactérias alcalino-resistentes foram semeadas em ágar, com ou sem troca do meio, e quantificadas por CFU/mL. A susceptibilidade antimicrobiana das diferentes cepas, estressadas ou não (controle), foi determinada pelo Etest; e o biovolume do biofilme foi quantificado microscopicamente. Para avaliar a capacidade fagocítica, macrófagos obtidos a partir de monócitos do sangue periférico foram desafiados com as diferentes cepas, estressadas ou não em meio BHI-alcalino, por 30 minutos, na proporção 5:1 (bactéria/macrófago), e corados com Laranja de Acridina. Foi contado o total de macrófagos com bactérias internalizadas, considerando o número de bactérias internalizadas por célula (<5 e =5). A concentração de NO foi medida em sobrenadantes, através da reação de Griess, e a expressão de TLR2 e CD14 pelos macrófagos foi analisada por citometria de fluxo. Os resultados revelaram que Enterococcus oriundos de canal radicular foram menos resistentes ao estresse alcalino e mais susceptíveis aos antibióticos testados, do que as bactérias oriundas de urina. A falta de nutrientes foi um fator determinante para o crescimento bacteriano de todas as cepas. O biovolume dos biofilmes foi semelhante para todas as cepas estudadas, e não foi alterado após exposição ao BHI-alcalino. Na presença de bactérias submetidas ao estresse alcalino, houve um menor número de macrófagos com bactérias internalizadas, em comparação ao controle. No entanto, a produção de NO e a expressão de TLR2 e CD14 não foram alteradas. Independentemente da cepa utilizada e da presença de estresse alcalino, a maioria dos macrófagos apresentavam-se com =5 bactérias internalizadas por célula. Na ausência de estresse, as cepas de urina resultaram em maior produção de NO que aquelas oriundas do canal radicular; entretanto, a produção deste gás foi semelhante entre as cepas após estresse alcalino. A partir desses resultados, podemos concluir que bactérias E. faecalis de urina diferem daquelas oriundas do canal radicular, principalmente quanto a susceptibilidade/resistência microbiana; assim sugerimos que estudos envolvendo o campo da Endodontia devam ser realizados com cepas oriundas de canal radicular, preferencialmente que de urina. Concluiu-se ainda que um ambiente alcalino associado a falta de nutrientes pode reduzir o crescimento de E. faecalis. Adicionalmente, o estresse alcalino pode levar a alterações na estrutura da parede de E. faecalis, o que dificulta o seu reconhecimento, reduzindo sua fagocitose, mas não a sua capacidade de ativar a produção de NO, pelos macrófagos. Assim, uma medicação intracanal a base de hidróxido de cálcio associada a restaurações coronais muito bem adaptadas, para se evitar infiltração, é fundamental em tratamentos endodônticos. No entanto, os efeitos do estresse alcalino, nos Enterococcus alcalino-resistentes, podem prejudicar sua fagocitose, contribuindo para sua persistência na doença endodôntica.(AU)

Enterococcus faecalis (E. faecalis) is an microorganism present in persistent endodontic lesions, with greater resistance than other bacteria to the calcium hydroxide, an alkaline intracanal dressing which eliminate several bacterial species during endodontic treatment. The objectives of this study were: (a) to evaluate the response of E. faecalis, isolated from root canal, under alkaline-stress, starvation, antimicrobial resistance/susceptibility and biofilm formation on dentin disks; (b) to evaluate the phagocytic ability and the nitric oxide (NO) concentration of human macrophages against root canal E. faecalis isolates submitted to alkaline stress; (c) to evaluate the intensity of TLR2 and CD14 expression on the surface of macrophages challenged with the different bacterial strains. The bacterial strains used were: ATCC 4083 (CANAL 1) and a clinical strain, obtained by us, from a primary endodontic lesion (CANAL 2), both isolated from pulpless teeth; and ATCC29212, isolated from urine (URINE), was a reference for comparison. All strains were inoculated in alkaline-BHI broth for 4, 24, 48 and 72 hours. The alkalineresistant bacteria were seeded in agar and quantified by CFU/mL. Antimicrobial susceptibility of bacterial strains, stressed or not (control) was determined by the Etest and the biovolume after biofilm formation was quantified by microscopy. To evaluate the phagocytic ability, macrophages obtained by culture of peripheral blood monocyte, were challenged with bacterial strains, stressed or not in BHI-alkaline for 30 minutes at 5:1 ratio (bacteria/macrophages) and stained with Acridine Orange. The total of macrophages with internalized bacteria and also the number of internalized bacteria per cell (<5 and =5) were counted. The NO concentration in the supernatants was measured by Griess reaction and the intensity of TLR2 and CD14 expression on the surface of macrophages was also analyzed by flow cytometry. Results shows less resistance to alkaline stress in root canal strains and less resistance to tested antibiotics when compared with urine enterococci. The lack of nutrient was a determining factor for the bacterial growth in all enterococci strains. The biovolume of biofilm formed by all strains were similar, and were not altered after exposure to an alkaline-BHI. In the presence of alkaline-stressed bacteria, there was a smaller number of macrophages with internalized bacteria, when compared to the control. The NO production or the TLR2 and CD14 expression were not altered. Regardless of the strain or alkaline environment, the number of macrophages that showed =5 internalized bacteria per cell was higher. Without an alkaline-stress the NO production results higher in the urine strain, when compared with the root canal strains, however, was not modificated after the exposure of bacteria to alkalinestress. We conclude that root-canal strains have different features when compared with urine enterococci, with the main differences being evident in their resistance/susceptibility to antibiotics; thus, we suggest that researches with aims directed to interpreting responses to endodontic treatment should be conducted with strains from root-canals. Besides, an alkaline environment associated to a starvation condition can reduce bacterial growth. Additionally, alterations in the structure of bacterial cell wall after alkali-stressing possibly made their recognition difficult, reducing their ability to be phagocytized, but not their ability to activate NO production. Therefore, intracanal medication with calcium hidroxyde dressing and coronal restorations, to prevent infiltration, should be critical in treatments of endodontics infections. However, the impact of alkaline stress, in alkaline-resistant enterococci, can impair the phagocytosis, contributing to their persistence in endodontic disease.(AU)

Probiotic technological and functional characteristics of Lactobacillus strains isolated from chicken gut / Características tecnológicas e funcionais de linhagens de Lactobacillus isoladas do trato gastrointestinal de frangos

Lactobacillus spp. isolated from different portions of chickens' gastrointestinal tract were evaluated concerning their ability to survive in a water-in-oil (W/0) emulsion containing sesame and sunflower oil. After sixty days of emulsion storage under refrigeration, three of five strains tested survived in number equal to or higher than 10(6)cfu/g. Lactobacillus reuteri 2M14C, which presented the highest survival in W/O emulsion (10(7)cfu/g), was tested for its capacity to resist throughout the passage through gnotobiotic mice gastrointestinal tract and for the ability to stimulate murine peritoneal macrophages phagocytosis. This strain remained at a number above 10(9)cfu/g feces during ten days of monoassociation, and monoassociated mice showed phagocytic activity significantly greater than the germ-free controls (P<0.05). The results suggest that the formulation can be used to incorporate viable Lactobacillus spp. cells in animal feed. Moreover, the results suggest that L. reuteri 2M14C is a strong candidate to be incorporated in probiotic formulations for use in chicken.

Lactobacillus spp. isolados de diferentes porções do trato gastrintestinal de frangos foram testados quanto à capacidade de se manterem viáveis em uma emulsão água/óleo (A/O) contendo óleos de gergelim e de girassol. Após sessenta dias de estocagem sob refrigeração, três de cinco linhagens testadas sobreviveram em concentração igual ou superior a 10 6 UFC/g. Lactobacillus reuteri 2M14C, que apresentou maior capacidade de sobrevivência na emulsão desenvolvida (10 7 UFC/g), foi testado quanto à sua capacidade de sobreviver às condições do trato gastrintestinal in vivo em camundongos gnotobióticos. Após dez dias de monoassociação com L. reuteri 2M14C, foi testada também a capacidade de estimulação da atividade fagocítica de macrófagos peritoneais. A linhagem permaneceu em número superior a 10 9 UFC/g de conteúdo fecal durante os dez dias de monoassociação, e os camundongos monoassociados apresentaram atividade fagocítica maior (P<0,05) que a do grupo controle isento de germe. Os resultados sugerem que a formulação proposta é capaz de manter a viabilidade de células de lactobacilos para adição em ração animal, necessitando, no entanto, de um acompanhamento dessa viabilidade por tempo maior de estocagem. Além disso, os resultados demonstram que Lactobacillus reuteri 2M14C é um forte candidato a ser adicionado em formulações probióticas para uso em frangos.

Efeito do treinamento físico moderado e intenso sobre os mecanismos de defesa de ratos adultos / Effect of moderate and intense physical training on the mechanisms of defense in adult rats

OBJETIVO: Analisou-se o impacto do treinamento físico moderado (TFM) e intenso (TFI) sobre o perfil leucocitário e a atividade microbicida de macrófagos alveolares, em 29 ratos machos Wistar. MÉTODOS: Foram formados três grupos: controle-sedentário (CS), treino-moderado (TM) e treino-intenso (TI). Os TFM e TFI foram efetuados através da natação, com aumento progressivo de carga conforme o peso corporal, até um máximo de 3% para o TFM, e 5% para o TFI. As coletas de sangue para contagem total e diferencial dos leucócitos foram automatizadas através do analisador hematológico Sysmex XT- 1800i (Roche®) antes e após o treino. E ao final realizou-se o lavado broncoalveolar para determinar a taxa de fagocitose e a produção de óxido nítrico (ON) de macrófagos. RESULTADOS: O grupo TM apresentou valores maiores para o número de leucócitos (12,77±2,0 x 17,25±2,4 10³/mm³), linfócitos (8,87±1,0 x 12,5±2,1 10³/mm³) e neutrófilos (0,99±0,5 x 3,18±1,0 10³/mm³), p<0,05. Apresentou também uma maior produção de ON (15,77±4,9µmols/mL) e da taxa de fagocitose (38,6%±8,65) em relação ao CS (6,58±1,9µmols/mL e 24,4%±7,40, respectivamente). Enquanto que, o grupo TI apresentou menor taxa de fagocitose (13,1%±1,52 x 24,4%±7,40), maior produção de ON (38,40± 2,1x 6,58±1,9 µmols/mL) e aumento apenas, no valor dos neutrófilos (2,6±1,4x 0,99±0,5 10³/mm³) quando comparado ao CS, p<0,001. CONCLUSÕES: O TFM proporcionou melhora nos mecanismos de defesa dos animais adultos. Enquanto que o TFI reduziu a taxa de fagocitose o que poderá implicar em prejuízo da atividade microbicida dos animais.

OBJECTIVE: To assess the impact of moderate (MPT) and intense physical training (IPT) on the white blood cell profile and the microbicide activity of alveolar macrophages in 29 Wistar male rats. METHODS: The sample was separated into three groups: control group (sedentary), moderate training (MT), and intense training groups (IT). Swimming was the tool used to classify both moderate and intense training groups with a progressive increase of exercise load regarding body weight (up to 3% for the moderate physical training and 5% for the intense training group). The blood samples used to count total and differential leucocytes were automated by a hematological analyzer Sysmex XT-1800i (Roche®) before and after training sessions. At the end of the process, a bronchoalveolar lavage was carried out so to determine the amount of phagocytosis and the production of nitric oxide (NO) of the macrophages. RESULTS: The MT showed an increase in the number of leucocytes (12,77±2,0x17,25±2,4 10³/mm³), lymphocytes (8,87±1,0x 12,5±2,1 10³/mm³) and neutrophils (0,99±0,5x3,18 ±1,0 10³/mm³), p<0,05. There was also a higher production of NO (15,77±4,9µmols/mL) as well as a higher phagocytosis rate of (38,6%±8,65) as to the control group (6,58±1,9 µmols/mL and 24,4%±7,40, respectively). Whereas the IT showed a smaller phagocytosis rate (13,1%±1,52x 24,4%±7,40), a greater production of NO (38,40±2,1 x 6,58±1,9 µmols/mL) and an increase only in the number of neutrophils (2,6±1,4 x 0,99±0,5 10³/mm³) compared to the control group, p<0,001. CONCLUSIONS: The MPT induced a significant improvement in the defense mechanisms of the adult rats. On the other hand, the IPT induced a reduction in phagocytosis rate which could lead to the microbicide activity of the rats being damaged.

WBC count and functional changes induced by co-administration of clofazimine and clarithromycin, in single and multiple doses, in Wistar rats

Clofazimine and clarithromycin are used to treat leprosy and infections caused by Mycobacterium avium complex. Little data on the toxicity of co-administration of these two drugs are available. Here we evaluated the potential adverse effects of polytherapy with these two drugs in male Wistar rats by determining WBCs counts and other blood cell counts, neutrophilic phagocytosis, and burst oxidative, by flow cytometry. We observed an increase in WBCs, in multiple-dose regimens, and in polymorphonuclear cells, in both single- clarithromycin only and multiple dose regimens. We also observed a reduction in mononuclear cell counts in single and multiple doses. The drugs seem to reverse the mononuclear and polymorphonuclear cell ratio. An increase in oxidative burst was observed in animals treated with the drugs administered either individually or combined. In conclusion, clofazimine and clarithromycin change WBCs counts. Our results may contribute for a better understanding of the mechanisms related to the effects of co-administrating the two drugs.

Clofazimina e laritromicina são utilizadas no tratamento da hanseníase e em infecções causadas pelo complexo Mycobacterium avium. Devido à escassez de dados sobre a toxicidade de esquemas terapêuticos que associam estes fármacos, este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos adversos desta terapia, em ratos machos Wistar, por meio da determinação da contagem global e específica de leucócitos e ensaios de fagocitose e burst oxidativo de neutrófilos por citometria de fluxo. Houve aumento do número de leucócitos (dose múltipla) e de células polimorfonucleares (doses única e múltipla) nos grupos tratados com claritromicina em monoterapia ou associada à clofazimina e redução das células mononucleares, em doses única e múltipla, nos mesmos grupos. Os fármacos parecem inverter a proporção entre células mono e polimorfonucleares. Observou-se aumento do burst oxidativo nos animais tratados com os fármacos isolados ou associados. Concluindo, clofazimina e claritromicina provocam alterações leucocitárias e os resultados podem contribuir para melhor entendimento dos mecanismos relacionados aos efeitos da administração dos fármacos em associação.

Avaliação funcional de monócitos de bovinos naturalmente infectados pelo vírus da leucose bovina / Functional evaluation of monocytes in cattle naturally infected with the bovine leucosis virus

Para a avaliação funcional de monócitos de bovinos infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina (LEB), foram coletadas amostras de sangue de 10 vacas com sorodiagnóstico negativo (SN), 10 com sorodiagnóstico positivo e que manifestavam linfocitose persistente (LP), e 10 com sorodiagnóstico positivo alinfocitóticas (AL). Os monócitos foram separados por gradiente de densidade e aderência em placa, submetidos aos testes de viabilidade por exclusão do azul de tripan, fagocitose de partículas de Zymosan, espraiamento em lamínula de vidro e quantificação da liberação de peróxido de hidrogênio (H2O2) e de óxido nítrico (ON). Monócitos de animais com LP apresentaram os menores índices de viabilidade (P<0,001), de fagocitose (P<0,001) e de espraiamento (P=0,006). Também apresentaram maior produção de H2O2 sem prévio estímulo (P=0,001) e após estímulo in vitro com 12-miristato 13-acetato de forbol (P=0,006) do que monócitos de animais SN e AL. O aumento da produção de H2O2 proporcionado pelo estímulo foi menor (P=0,015) nos monócitos de fêmeas que manifestaram LP. Não houve diferença na produção de ON pelos monócitos segundo os grupos. Os resultados indicam que o vírus da LEB, apesar de infectar linfócitos B, altera funcionalmente os monócitos circulantes em bovinos que manifestam LP.

Assuming that the bovine leukosis virus (BLV) alters quantitatively and qualitatively bovine circulating leukocyte subpopulations, thus influencing the innate immune response, monocytes function in BLV-infected cattle was assessed. Peripheral blood was obtained from 10 BLV-negative cows (SN), 10 naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows (AL), and 10 BLV-infected cows with persistent lymphocytosis (PL). Monocytes were isolated by density gradient and adherence to plates. Cells were submitted to Trypan Blue dye exclusion viability assay, phagocytosis of Zymosan and cell-spreading assays, and quantification of hydrogen peroxide (H2O2) and nitric oxide (NO) production. Monocytes from cattle with PL had the lowest viability (P<0.001), phagocytosis of Zymosan particles (P<0.001), and spreading (P=0.006) rates. Additionally, monocytes from cows with PL had the highest production of H2O2 , with no prior stimulus (P=0.001), and after in vitro stimulus with phorbol 12-myristate 13-acetate (P=0.006). Nonetheless, the boost in H 2 O 2 production, provided by in vitro stimulus, observed in monocytes from cows with PL was lower (P=0.015) than that observed in monocytes from SN and AL cattle. There was no difference in NO production among groups. Results show that BLV, despite infecting B lymphocytes, alters innate immune functions of monocytes isolated from BLV-infected cows expressing PL.

Acute inflammatory response in Nile tilapia fed probiotic Lactobacillus plantarum in the diet / Resposta inflamatória aguda em tilápia do Nilo alimentada com probiótico, Lactobacillus plantarum na dieta

The present study evaluated the acute inflammatory response induced by carrageenin (500 µg) injected in the swim bladder of Nile tilapia, after fed or not probiotic supplemented diet. Fifty four fish were distributed in six treatments and three replicates: Group A: Fish fed unsupplemented diet: 0.5 mL saline-injected fish; fish injected with 500 µg carrageenin diluted in 0.5 mL saline; Non-injected. Group B: Fish fed probiotic supplemented diet: saline-injected fish; carrageenin-injected fish; Non-injected. Fifteen days after feeding the fish were injected with carrageenin or saline. After six hours, inflammatory exudate was collected, as well as the blood for hematocrit, red blood cell (RBC) and white blood cell (WBC) counts, differential count of leucocytes and phagocytic activity in the blood. Supplementation with probiotic did not influence the RBC, hematocrit and the numbers of lymphocytes and basophils in the blood. The number of neutrophils was significantly higher in supplemented fish injected with carrageenin. Glucose concentration in supplemented and non-injected fish was higher than that observed in the saline injected ones. Probiotic potentialized the migration of cells to the inflammatory focus in the animals injected with the carrageenin irritant. In fish injected with saline and carrageenin occurred the greatest phagocytic activity in the blood in relation to those treatments.

Este trabalho avaliou a resposta inflamatória aguda induzida por injeção de carragenina (500 g) na bexiga natatória de tilápia do Nilo suplementada ou não com probiótico na ração. Cinquenta e quatro animais foram distribuídos em seis tratamentos com três repetições: Grupo A: peixes alimentados com ração não-suplementada: Controle (injeção de 0,5 mL de solução salina estéril); Carragenina (injeção de 500 µg de carragenina); Não-injetada. Grupo B: peixes alimentados com ração suplementada com probiótico: Controle; Carragenina; Não-injetada. Após 15 dias de alimentação foi injetado carragenina ou salina. Após 6h, realizou-se a coleta de exsudato e sangue para determinação do hematócrito, contagens totais de eritrócitos, leucócitos, contagem diferencial de leucócitos e atividade fagocitária no sangue. A suplementação com probiótico na ração não influenciou o número total de eritrócitos, o hematócrito e os números de linfócitos e basófilos no sangue dos animais. O número de neutrófilos foi maior nos peixes suplementados com probiótico e injetados com carragenina. A glicose nos peixes suplementados com probiótico não-injetados foi maior do que nos injetados com salina. A suplementação com probiótico potencializou a migração de células para o foco inflamatório nos injetados com o flogógeno carragenina. Em peixes injetados com salina e carragenina, ocorreu maior atividade fagocitária no sangue em relação aos demais tratamentos.